棉属8个基因组荧光原位杂交比力及其发源与演化钻研pdf

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  棉为探针的杂交信号最强,申明陆地棉的O基因组供体种为戴维逊氏棉。 且海岛棉的NOR也是来自取D亚染色体组。 取雷蒙德氏棉的亲缘关系比来,雷蒙德氏棉为海岛棉D亚染色体的供体种。 有6个NOR都位于A基因组上。而且这些所有的45S 为A基因组的了。 9瑟伯氏棉的基因组取黄褐棉的D亚基因组同源程度最高,揣度瑟伯氏棉为黄褐 棉D亚基因组的供体种 环节词: 棉花,FISH,基因组,发源,演化 Abstract Thecottonis山emost fibereconomicintheworld.Itis to important crop cotton andevolutionforthecotton expoundorgin heredity carriesonthefluorescenceinsitu ofcotton hybridizationcomparfion eight toclearabout andthe andtheevolutionofthe species interspeciesrelationshiporigin mainresultareasfollows: Gossypium.The l。Gsomalensehas4 of45S has2 has8 singnal rDNA,Glongicalyx and signal,and have6 have2 locatedinnearendof signal.GarboreumsUonghybridizationsignal shorta/Tn medium inthenearendof chromosomeobviously,thehybridizationsignals of chromosomeshortarnl.and2smail intheend short hybridizationsignals ann.Gtrilobumhas6the withthesamesizeand locatedintheendofthe signal sUength short chromosomearin. has2 its45SrDNA ItisnoticeablethatGraimondii satellites.and major islocatedin andGbickiiarethe signal secondaryconstriction.Gtongicalysspecialspecies. are for The45srDNA locatedinthe constrictionthe hybridizationsignals secondary arln. Gbickiihas245SrDNAlocatedintheendofchromosome Glongicalyx,and long 2.Ghebaceumhas itsown DNA)as taking majorsingal gDNA(genomic Graimondiihasminor itsown as ofthe arelocatedin signaltaking gDNAprobe.allsignal thenearcentromere the arelocatedintheendofthe single genes re:gions.and copy chromosome. TM一1 3.Thereare26redchromosomeand26bluechromosomewiththe and blockDNA.It that as DNA.Garboreumas Graimondiias implies target gDNAprobe Ghirsutumisa Garboreumisthe ofA allotetroploidspecies,and diplodprogenitor oftheGhirsuturn subgenome 4,rDNAfromGhirsutumhasbeen toaD homogenizedgenomerepeattype. G.hirsutum 5.Gdavisoniiisthe ofD ofthe diplodprogenitorsubgenome has6 2NORsofthemare 6.Gbarbadense NORs(nucleolar organizingregions),the locatedintheA ofthechromosomeofGbarbadense.andthe4NORsare subgenome D loacatendintheD NORofGbarbadensecomesfrom subgenome。The genome D ofthe 7.Graimondiiisthethe ofthe diplodprogenitorsubgenome 26 A Gmustelinumchromosomeas 8.Gmustelinumhas redsubgenometaking DNA.Gherbaceum.var.africanumas andsalmonDNAasblockDNA.andthereare probe are2NORs 2 NORslocatedintheA withoutanother4NOR.andthere major subgenome as DNA.AUof ifGmustelinumis DNA.Gherbaceumas andGdavisonifblock target probe of arelocatedin A basedontheDouble theNoRsGmustelinum the subgenome insitu allofthe45SrDNAhavebeen toaA Fluorescence hybridization.and repeattype. genome 9.Gthurberiisthethe ofD oftheGmustelinum subgenome diplodprogenitor Keyword:gossypium,FISH,genome,origin,evolution IV 英文缩略表 英文缩写 英文全称 中文名称 BAC bacterialartificialchromosome 细菌人工染色体 base 碱基对 lap pairs BSA bovineserumalbumin 小牛血洁白卵白 cM centimorgan 厘摩 DNA 叶绿体DNA cpDNA chloroplast CTAB bromide 十^烷基三甲基溴化胺 cetyltrimethyammonium DAPI 4.6-二氨基-2-苯基吲哚 4。6-diamidino一2-phenylindole DIECA acid 二乙基二硫代氨基酸 diethyldithiocarbamic ISH insitu 原位杂交 hyridization tetraacetate EDTA disodium 乙:胺四乙酸二钠 ethylenediamine insitu FISH fluorescence hybridization荧光原位杂交 FITC fluorescein isothiocyanate 异硫氰酸荧光素 DNA 基因组DNA gDNA genomic h hour 小时 ITS internaltranscribed spacers 内部间隔区 IGS intergenicspacer 基因的间隔区 kb kilobase 干碱基 mln minute 分钟 NORs nucleolar regions 核t:组织区 organizing PBS saline 磷酸盐缓冲液 phosphate—buffered million 百万分之一 ppm partsper rDNA ribosomeDNA 核糖体DNA SDS sodium sulte 十二烷基磺酸钠 dodecyl ssDNA salmon DNA 鲑鱼精子DNA sperm YAC artificialchromosome 酵母人工染色体 yeast V 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我小我正在导师指点下进行的研究工做及取得的研究成 果。尽我所知,除了文中出格加以标注和称谢的处所外,论文中不包含其他人曾经发 表或撰写过的研究,也不包含为获得中国农业科学院或其它教育机构的学位或证 书而利用过的材料。取我一同工做的同志对本研究所做的任何贡献均己正在论文中做了 明白的申明并暗示了谢意。 研究生签名 芸,影 时间:。7年 ‘月 丛日 关于论文利用授权的声明 本人完全领会中国农业科学院相关保留、利用学位论文的,即:中国农业科 学院有权保留送交论文的复印件和磁盘,答应论文被查阅和借阅,能够采用影印、缩 印或扫描等复制手段保留、汇编学位论文。同意中国农业科学院能够用分歧体例正在不 同上颁发、学位论文的全数或部门内容。 (保密的学位论文正在解密后应恪守此和谈) 论文做者签 。≯J月l岁日 导师签名 间: 年 月 日 中国农业科学院博_卜学位论文 第一章文献综述 第一章文献综述 1.1棉属的分类研究 L.)、草棉(GherbaceumL) 一个属(genus),最后只要3个种(species):亚洲棉(Garboreum 和海岛棉(GbarbadenseL),后来林奈又添加了2个种:陆地棉(GhirsutumL)和教 棉(Gneligens 对棉属的研究颇具独创性,正在他的专论中,棉属被分成54个种。这是一部十分成熟 的《世界野生棉和栽培棉》为棉属分类树立了第二个里程碑。正在他的专著中,将棉属 分成42个种和21个变种。 晚期的棉属动物分类研究,根基根据是棉属动物的形态特征和地舆分布。因为棉 属动物的世界性分布,其形态特征和发展习性存正在着普遍的变异,分歧的分类学家所 统计,正在棉属的分类汗青中,棉属的种名竟达675个之多。 细胞学研究手段得以普遍使用之后,棉属的分类才有了环节性的冲破。1903年, 了海岛棉品种ATffi的染色体数X=20。虽然他们的结论明显都是错误的,但他们确为 定了根本。 数目标研究,把染色体数目和倍性做为棉属分类的次要根据,并连系形态特征和 地舆分布,把棉花分成两大类、四个亚类、16个种,即旧世界的二倍体棉(2n=2x=26) 和新世界的四倍体棉(2n=2x=52)–二个大类。新世界棉又分成中美洲亚类和南美洲亚类, 旧世界棉分成非洲亚类和亚洲亚类。Zaitzev把形态特征千差万此外具有纤维的棉种, 以其配合的细胞学特征进行归类,每个亚类又具有完整的地舆分布,为棉属的准确分 中国农qE科学院博l一学位论文 第一章文献综述 类指了然标的目的。 结前人已堆集的棉属细胞遗传学学问的根本上连系他本人进行的大量的种间杂交研 究,以杂种儿女减数时染色体的配对环境为根据,参照棉种的地舆分布,提 出了划分染色体组的细胞学分类准绳:即凡种间染色体同源性较高的棉种归为统一染 色体组,反之则列为分歧的染色体组。据此将二倍体棉种分为A、B、c、D和E等5 个染色体组,别离代表亚洲棉、非洲棉、棉、美洲棉和阿拉伯棉种的染色体组。 四倍体棉种被认为是A染色体组和D染色体组种问杂交发生的双二倍体种,因而, 将其定为AD染色体组。至此,现代棉属的分类框架才最终得以构成。当前的相关棉 属的分类研究根基上就是正在此框架内进行一些种或亚种(变种)的修订及新种的发觉、 判定、命名等工做。 正在东非搜集到的新种长萼棉((2longicalyx 前人关于陆地棉和海岛棉AD染色体组取A、B、c、D和E染色体组杂交后发生的 F1三倍体和六倍体的染色体配对材料进行了比力阐发,成果发觉AD×长萼棉取ADxE 正在减数时二价体和多价体频次有显著的差别,ADx长萼棉的三倍体的单细胞平均 表白长萼棉取E染色体组对AD染色体组棉种的遗传亲和性有很大的差别。同时正在染 色体大小上,E具有较长的染色体,而长萼棉倒是中等大小的染色体。据此, 为F1。 原产于的比克氏棉(Gbickii 等(1979)的核型阐发,它的核型显著分歧于c染色体组的模式种斯特提棉 (GsturtianumWillis),其染色体遍及较小,单细胞中染色体的总长度和单个染色体的 平均长度别离比斯特提棉削减19.4u和0.73u,并且比克氏棉无随体,这是其时棉属中 分出,另立为G染色体组,并确定比克氏棉为G1。然而波等(1994)的核型分 析供给了清渐可辩的照片,比克氏棉较着具有两对随体。波等(1994)通过比克 不支撑比克氏棉零丁另立染色体组,取木横组的其他棉种归为一个新的染色体 棉的叶绿体DNA和核糖体DNA的性内切酶的内切位点。成果表白,比克氏棉的 2 中同农业科学院博I‘学位论文 第一章文献综述 叶绿体DNA和斯特提棉的叶绿体DNA存正在着很大的同源性;核糖体DNA却取 棉和奈尔逊氏棉的同源性较好。他们认为比克氏棉来历于两个先人:雷同斯特提棉的 先人种只供给细胞质;雷同棉或奈尔逊氏棉的先人种供给细胞核。 棉染色体组的复杂性,值得进一步深切的摸索取研究。 虑到这些棉种全数发源于Kimberly地域,将这些棉种划归为K染色体组。 普遍接管的棉属分类方案。近年来,跟着新棉种的不竭发觉、弥补和捣属研究工做的 组、9个亚组50个种,这是目前最新的分类方案(表1)。 襄1.抽属的爱其染色体组编号和地舆分布 中国农业科学院博十学位论文 第一章文献综述 续表l 1.able1.continued 能够看出,经形态学、细胞学研究构成棉属的分类框架后,相关棉属的研究, 以分类涵义而言,仅限于少数的调整修订及新种的发觉、命名等工做。总体而言, 对棉属细胞学为从的分类系统未做严沉改变。也就是说,以辨别为目标棉属分类的历 史使命已根基完成,自此当前,相关棉属研究则向更高条理的标的目的成长,转面研 究棉属的发源种问关系取演化机制。 1.2四倍体棉种发源取演化的研究 4 中国农业科学院博士学位论文 第一苹文献综述 棉杂交后加倍而成的异源四倍体的。这一惹起了人们对人工合成异源四倍体 演化的会商。 四倍体棉种中的染色体组有2个彼此易位取草棉的A染色体组分歧,有3个彼此易位 取亚洲棉的A染色体组分歧,因而他揣度四倍体棉种供给A染色体组的是草棉。 正在大约56个性位点变异中有28个性位点正在A、(AD)染色体组间未发觉差 异,较着区分于D染色体组,而2个插入突变(大约150bp)仅正在D染色体组中的叶 倍体棉种细胞质供体种是来历于A染色体组中cpDNA雷同的棉种。 目前,草棉做为四倍体棉种的母本供体种己为大师所认同,而其父本供体种即四 倍体棉种的D染色体组供体种则不合较大。 体组的异源四倍体,并发觉亚洲棉×瑟伯氏棉的杂种Fl染色体配对不到一半,而加倍 成异源四倍体具有一般的二价体数目和相当高的可育性,因而他认为瑟伯氏棉是异源 正在其时所发觉的6个D染色体组棉种中,只要雷蒙德氏棉取亚洲棉连系才能为四倍体 和过氧化氢同工酶时察看到,合成二倍体的同工酶酶谱取其二倍体亲本的酶液人工混 合体的酶谱极其类似。间接选用雷蒙德氏棉取阿非利加棉相夹杂取天然四倍体种进行 比力阐发,认为草棉和雷蒙德氏棉很可能是异源四倍体种的先人基因组供体种。周楠 (1990)的过氧化物同工酶、钱思颖等(1985)的酯酶同工酶阐发也附和此概念。 棉(A1)的棉种相连系的根本上构成的。 个棉种进行了扫描电镜察看,发觉分歧棉种花粉曲径大小、花粉上萌生孔的数目取染 色体的倍数性均无相关关系,各棉种花粉型的壁的条理和布局也无较着差别,因此认 为孢粉学证明的是棉属单位发生学说。 体配对差别,认为A染色体组取雷蒙德氏棉雷同种杂交发生海岛棉,取雷蒙德氏棉的 5 中国农业科学院博十学位论文 第一帚文献综述 系统发源而有分歧的D亚染色体组,则包罗这两个种和一个美洲二倍体种正在内的六倍 体杂种,就该当有分歧的多价体频次及某一既定基因座的分手。然而,现有研究并非 如斯,两个六倍体杂种具有十分类似的多价体频次及分手比率。 蒙德氏棉杂交发生海岛棉。接着草棉又被带到墨西哥,取拟似棉或三裂棉杂交发生陆 只要几千年的栽培汗青。 (vonol 棉中却有较高的含量。色谱阐发发觉,海岛棉和克劳茨基棉类似,而陆地棉和雷蒙德 氏棉类似。据此Parks(1975)认为克劳茨基棉取A染色体组种连系构成海岛棉和毛棉, 谱研究认为,草棉取三裂棉连系丽发生帕默尔棉后再进化成陆地棉,草棉取雷蒙德氏 棉连系后发生海岛棉。波等(1990)将D染色体组每~个种的核型别离取异源四倍 体栽培种D染色体组核型一一比力,并连系地舆分布和DNA含量,认为拟似棉是海 岛棉D染色体组供体种,戴维逊氏棉是陆地棉D染色体组供体种。聂汝芝等(1955) 核型阐发指出,D5取D3一d取陆地棉的D染色体组很近似,而Dl取海岛棉的D染 色体组近似。 正在大约56个性位点变异中有28个性位点正在A、AD染色体组间未发觉差别, 较着区分于D染色体组,而2个插入突变(大约150bp)仅正在D染色体组中的叶绿体 使用RFLP做图的方式对四倍体棉花的基因组进行研究,发觉根据反复位点的类型可 以正在棉花基因组中识别出11对部门同源的染色体,对这部门同源染色体上连锁群 (1inkage group)的分布式样进行比力发觉,只要两对部门同源染色体正在基因陈列顺 一次较着的易位;对棉花二倍体先人的基因组(A和D)进行比力,能够看出它们正在 基因陈列挨次上常类似的,但正在四倍体基因组中它们相互之间就表示较着的差 异,由此能够恰是多倍化推进了这种进化改变的发生。宋国立(1998)对包罗4 个栽培种的32个种和7个陆地棉野生种系RAPD阐发,得出四倍体棉种是由取草棉 6 中国农业科学院博十学位论文 第一章文献综述 雷同的棉种做母本供体种,取戴维逊氏棉雷同的棉种做父本合成的异源四倍体种。 为0.68%,而D基因组二倍体棉种为1.05%。这些成果申明亚洲棉(或草棉)取四倍 体棉种A基因组的类似程度约为雷蒙地棉取四倍体棉种D基因组的类似程度的0.5 共有368条多态性片段,此中的143条是和A基因组二倍体棉种共有的,84条是和D 基因组二倍体棉种共有的,由此推论异源四倍体棉种的A染色体组取二倍体棉种的A 染色体组的亲源程度比其D染色体组取二倍体棉种D染色体组的亲源程度更近。郭 棉种进行了遗传多样性阐发,所获得的成果支撑拟似棉是D染色体组最原始棉种。 虽然目前存正在着相关四倍体棉种发源单位取多元之争,可是四倍体棉种是由非洲 棉(A)和美洲棉(D)连系后加倍而成的异源四倍体种,已构成共识,然而,一个 非洲二倍体,一个美州二倍体种,远隔大洋,若何连系正在一路并发生异源四倍体种呢? 现有的研究,众口一词。 之前,A取D染色体组的棉种曾经存正在,且分布区域彼此堆叠,如许A、D连系便形 成了异源四倍体棉种。 边及其附近,认为草棉通过大西洋漂流到美洲取D染色体组棉种连系构成四倍体棉 染色体组棉种连系后构成的。 1.3二倍体棉种发源取演化的研究 分属于8个染色体组的二倍体棉种各染色体组间的演化关系是个很复杂的理论 种F1减数过程中染色体的配对环境,提出分布于阿拉伯地域的E染色体组可能 是最原始的先人种,由于E染色体组和其它染色体组杂交构成的杂种,其染色体同源 配对最低,呈现最高频次的单价体;A、B染色体组则是由统一先人分化出来的。因 为A、B染色体组的种间杂种平均单价体频次为3;D染色体组取c染色体组分化正在 A、B染色体组之前。由于A、B取c、D两个染色体组的种间杂种单价体频次为10~ 18。因为D染色体组构成的杂种单价体频次又高于c染色体组构成的杂种的单价体 7 中国农业科学院博卜学位论文 第一荦文献综述 是由统一先人进化而来的,细胞学上等同于两染色体组。因而,它们取D、E杂交形 成的杂交种单价体频次该当等同或类似,但他的尝试成果A、B取D和E构成的杂种 取单价体频次却相差较大。申明仅靠杂种单价体频次并不克不及阐明所有二倍体种间的演 化纪律。 地棉、拟似棉5个D染色体组的种正在5.5cm处有一的深带,而此带仅正在B染色 发觉,B染色体组取其它各组的平均相关系数最高(r–O.59),并考虑到B染色体组的 大面积的地舆分布,认为B染色体组可能是比来的棉属先人代表种。据此他揣度,D13 组是由B染色体组通过巴西至秘鲁,最初达到墨西哥中部衍生而构成的,而D8的形 成则通过另一条路子,即B染色体组通过加勒比海至墨西哥衍生成的。E染色体组由 B染色体组向北衍生构成的,A染色体组和C染色体组则是由B染色体组向南和向东 南衍生而构成的。如许便构成了现今二倍体棉种的地舆分布款式。聂汝芝(1993)通 过22个二倍体棉神的核型阐发也认为,现有的二倍体棉种是B染色体组最原始的祖 (1976)按照表型性关系的道理,估价了系统发育的性状,发觉B染色体组是所有染 色体组中最具同质性的,其组内种间平均相关系数最大,并且取A、E、D染色体组 呈显著相关,取其它染色体组所平均相关系数最大,因此染色体组可看做是棉属其它 处共有一条的深带,此带除比克氏棉外,其它染色体组的棉种缺失此带。如许A 染色体组的发源问题就陷入悖论形态。 核DNA含量最高的是分布于的c染色体组,DNA含量最低的是分布于美洲的D 染色体组,他们据此提出D染色体组是棉属中的原始类群,其它染色体组是由D染 色体组中的反复序列扩增而构成的。然而仅按照DNA含量起码就认为是原始类群的 概念似乎过于简单化,由于按照已进行细致致阐发和比力研究的一些高档动物的属, 正在属内二倍体种之问的进化趋向均伴跟着DNA含量削减。此外,把D染色体组做为 最原始的种群,也取现今的概念相悖,凡是认为,发源核心一般都是分化核心,而现 今美洲仅分布一个D染色体组,而非洲则有A、B、D、E、F,5个染色体组。因而 大都人认为非洲是二倍体棉种的发源核心。 8 中国农业科学院博十学位论文 第一章文献综述 1.4棉属发源取演化的FISH研究 1.4.1 FISH手艺的成长 situ DNA原位杂交(in 体上定位特定靶DNA序列的手艺,它将基因组的DNA序列和染色体间接联系关系起来, 为宏不雅的细胞学和微不雅的生物学架起一座桥梁,构成了一门新的交叉学科~ 细胞遗传学(Friebe 几乎同时报道了利用放射性标识表记标帜的DNA或RNA对细胞制片或组织切片的染色体进行 and et andPardue Amaldfl969;Johnal,1969;Gall 的原位杂交尝试(Buongiorno—Nardelli 1969)。正在染色体原位杂交手艺的草创期,都是采用放射性同位素标识表记标帜探针,需要采用 放射自显影检测。这种检测的及其时克隆方式的缺乏使得DNA原位杂交技 e4a1.1982; 进行染色体原位杂交,成立了非放射性原位杂交手艺(Langer-Safer Manuelidiset andGill a1.1982)。1985年这项手艺被引进到动物(Rayburn1985)。正在非 eta1. 放射性原位杂交中,杂交位点可通过免疫酶联反映或荧光从来检测(Langer-Safer et 1982;Pinkel a1.1986)。此中通过荧光素检测杂交位点的原位杂交称为荧光原位杂交 insire (fluorescence 手艺比拟,FISH手艺的法式简单、活络度高、对比力着、可同时检测多个探针。这 些长处使之敏捷成为原位杂交的支流手艺。正在20多年的时间里,FISH手艺不竭成长 并正在动动物的细胞遗传学研究和基因组阐发如rDNA的定位、非整倍体的判定、易位 系的判定、反复序列的判定、物理图谱的建立中获得普遍的使用 1.4.2探针的的标识表记标帜及其品种 最先利用的非放射性标识表记标帜物是生物素(biotin)。用取生物素连系的核苦酸(凡是为 et et a1.1982;Pinkel 检测(Langer-Safer 自毛地黄的一品种固醇)标识表记标帜方式。用取地高辛连系的核酸(凡是为Dig.UTP)标识表记标帜的探 针可用连有荧光素的抗地高辛抗体检测。这两种标识表记标帜方式都属于间接标识表记标帜,标识表记标帜的探 针还可利用抗体进行级联放大以提高检测的活络度。除间接标识表记标帜外,还可用连有荧光 要特殊的检测步调就可间接显示杂交位点,不只尝试快速并且布景相对较清洁,只是 检测的活络度有所降低(SchwarzaeherandHeslop-Haxrison2000)。HSH尝试中的探针 9 中同农业科学院博十学位论文 第一荦文献综述 and 2000)。标识表记标帜 物(randomprimer)标识表记标帜和PCR标识表记标帜(见SchwarzacherHeslop—Harrison 所发生的探针长度一般要求正在300bp摆布,如许的长度既可取靶DNA构成不变的杂 种DNA,又可以或许容易地进入染色质构型中的DNA。利用缺口平移和随机引物标 记方式一般能够获得合适的探针长度,可是PCR标识表记标帜只适合于小的质粒插入DNA (Schwarzacher 2000)。有尝试显示将DNA亚克隆或切成较小的片 andHeslop—I-Iarfison et 段后再标识表记标帜能够显著地提高标识表记标帜结果(Salvo-Garridoa1.2001)。 基因组的杂交信号,获得的遗传消息更完整。 正在动物FISH尝试中使用得最多的探针是克隆的反复DNA序列,典型的是 检出率很高,反复性好,成果靠得住。正在FISH尝试中也可选用单拷贝或低拷贝DNA序 列做探针。对有主要经济价值的基因进行FISH做图不只可以或许供给基因正在染色体上物 理消息,并且正在基因的图位克隆和其它的物理做图策略中有十分主要的价值。不 过,正在动物有丝染色体中定位几个kb大小的单拷贝或低拷贝DNA序列正在手艺上 andGill 比力坚苦(Jiang 1994),缘由是动物材料的染色体系体例片往往有较多的布景,杂 交经检测法式后常常会发生一些布景信号,使实正的杂交信号不易取布景信号相区分; 并且,因为靶DNA序列小,探针接触靶DNA的几率小,探针不易取靶DNA杂交, 或杂交后显出的信号弱,以致杂交的检出率很低,尝试的反复性较差。一般认为动物 中期染色体正在信号不放大和晦气用CCD的环境下可检测的方针DNA不低于 et IOkb,通过信号的放大并用CCD,则可检测1-3 a1.1999)。 kb的靶DNA(deJong 有几项研究表白,采用高活络度的酪胺信号放大FISH(tyramidesignalamplification FISH et Kik et and a1.2000;Khrustaleva a1.2004).例如,正在转基因洋葱 (Guzzo 2001:Stephens andKik 2001);正在 eta1. 2004)。 et et 单拷贝或低拷贝序列难以杂交和不易检测的坚苦(如Hansona1.1995;Jianga1.1995; el eta1.1997Deselet Zhua1.1996。Lapitan YAC克隆更大,取靶DNA的杂交几率大大添加;并且杂交信号的强度和检出率显著提 10 中国农业科学院博+学位论文 第一章文献综述 et et et cta1.1998;Dcsel a1.1995;Zhua1.1996;Nakamura 图(如Jiang a1.1997;Rajyashd et cta1.1997; a1.2001),并且,BAC-FISH还正在动物细胞遗传图的建立(如Gomez et et et a1.2001b;Kulikovaa1.2001;Islam-Faddietal.2002;Howella1.2002;Kim Cheng et et eta1. a1.2005b)、染色体的识别取核型阐发(Dongetal.2000;Kim al,2002;Cheng et et eta1. a1.2004;Kim 2002a;刁hang a1.2005a)以及小基因组染色体的涂染(Schubert et 2001;Lysak 物中的使用。不外,段克隆中常常含有反复序列,这些反复序列会正在靶位之外的 染色体区域发生非的杂交,因而需要正在杂交液中插手过量的非标识表记标帜Cot-1DNA来 探针对2种二倍体草棉(基因组型AA)、雷蒙德氏棉(基因组型DD)进行荧光原位 杂交,正在D基因组雷蒙德氏棉上发生了一对很强的荧光信号,而正在A基因 草棉上发生一对弱的荧光信号,而且信号正在两个二倍体中都取核仁组织区是统一 阻时仅正在雷蒙地棉上察看到反复信号,最初他得出D一基因组发源于BACl928。 由于动物基因组的不同次要源于它们的反复DNA序列的分歧,并且动物基因组 中都有高含量的反复序列,因而整个基因组的DNA可做为FISH探针来识别植 物杂种、异源多倍体和沉组的育种品系中分歧来历的染色体和染色体片段 ct (Schwarzacher insitu (genomic 别的一个亲本基因组的总DNA来封阻非的交叉杂交,使分歧的基因组得以区分。 可利用分歧的半抗原标识表记标帜分歧来历的基因组总DNA,对异源多倍体和近缘间杂 in 种或它的衍生系进行多色基因组原位杂交(multicolorgenomic 1993;Mukai McGIS鳓阐发(Kcnton 的基因组来历方面比一般GISH的分辩能力要高得多(nan 阻的环境下用一个的基因组的总DNA取近缘或远缘的染色体杂交的GISH and cta1. 1994;Galasso 阐发也能够研究动物基因组的进化(OrgaardHeslop-Hardson et ct 1997)或进行比力基因组阐发(Ninaa1.2001;Zollcra1.2001)。还能够用两种分歧标 in 记的基因组DNA探针颠末预退火反映的同时基因组原位杂交(simultaneousgcnomic situ with hybridizationprobe 间不异和分歧的反复DNA挨次正在染色体上的分布特征,从而切磋动物的进化关 a1.2001;Raskinaet a1.2002)o 系(Belyayev&Raskina.1998;Belyayevet 中国农qk科学院博l一学位论文 第一章文献综述 1.4.3 FIsH手艺正在棉花发源取演化研究中的使用 棉至多是八倍体发源。棉花是高度多倍体化,且轮回发生,多倍体化后,反复元 件可能导致基因组的变化,也能导致功能和细胞遗传的单一化。英等(1999)以 亚洲棉品种石系亚一号的gDNA为探针,对海岛棉进行了基因组原位杂交,成果显示 海岛棉A取D两亚染色体组的少数之间发生过互换,或两亚组部门染色体的局 探针,采用棉属二倍体野生种瑟伯氏棉gDNA做封阻,对海岛棉品种“海7124”的体细 胞染色体进行荧光原位杂交,成果清晰地察看出显示红色荧光的26条染色体,这曲 不雅地了前人相关四倍体棉种是双二倍体发源的推论。别的研究中还发觉D亚组中 有2-4对染色体的相对长度大于A亚组染色体,申明以前的四倍体棉种A、D亚组分 类有失偏颇。此后又对ADD型、ADC型三倍体杂种减数染色体和TM—l体细胞 染色体进行荧光原位杂交,初次察看到A组染色体DNA以各类分歧体例渗入D或c 染色体中,且次要表示是单向的(邹美娟,2002)。 采用BAC克隆做为探针进行染色体原位杂交较低或单拷贝小片段DNA序列更 为容易,并且精确靠得住,从底子上降服了过去单拷贝DNA杂交的坚苦。单或低拷贝 DNA做 序列,特别是克隆到BAC载体的段DNA的原位杂交检测,需要Cot-1 杂交检出率由迄今沿用的质粒克隆探针杂交的10%以下提高到46.8%和59.2%(鄢慧 平易近,1998),检出染色体的号数取遗传图确定的染色体相符,而且可正在同源染色体和姊 妹染色体上同时检出杂交信号的比例较高(鄢慧平易近,1999),从而了操纵BAC克 的多个单拷贝序列的BAC克隆做为探针对2种二倍体草棉(基因组型AA)、雷蒙德 氏棉(基因组型DD)进行荧光原位杂交,正在D基因组雷蒙德氏棉上发生了一对 很强的荧光信号,而正在A基因草棉上发生一对弱的荧光信号,而且信号正在两个二 倍体中都取核仁组织区是统一染色体上的,他按照FISH信号正在A、D基因组的 强度分歧,以及非Cot-1DNA做封阻时仅正在雷蒙地棉上察看到反复信号,最初他得出 D一基因组发源于BACl928。 序列是D基因组所特有的。以这些反复序列为探针对四倍体棉花基因组进行原位杂 12 中国农业科学院博}学位论文 第一节文献综述 交,成果发觉正在二倍体程度仅限于A基因组的反复序列不只正在A基因组染色体上有 很强的杂交信号,正在D基因组染色体上也同样显示很强的杂交信号,这就意味着多倍 棉花为材料,选用6个正在四倍体基因组中正在A和D基因组染色体上都表示较强杂交 信号的反复序列为探针,别离取A和D基因组供体的二倍体先人进行杂交,成果发 现6个反复序列正在A基因组供体的二倍体先人基因组中都表示出预期的杂交式样,但 没有一个探针能正在D基因组供体的二倍体先人基因组中显示较着的信号,这进一步证 实了正在四倍体基因组中A基因组反复序列向D基因组的程度转移,或者是D基 因组中的部门同源序列已被A基因组的反复因子所代替或,Wendel称这种现象 为“基因组殖平易近化”。 编码区的多态性是研究动动物系统发育取进化的一个有用标识表记标帜,并且因为该基由于高 度反复序列,分歧染色体的这部门同源序列就可能发生彼此沉组,正在近缘中这些 反复序列通过频频的不合错误等交换或基因转换使其正在染色体上的位点以及基因拷贝数 发生变化,因此通过FISH手艺对其正在染色体上分布的、位点以及拷贝数几多进 行比力研究,能够确定近缘的亲缘进化关系及发源。 进行了原位杂交,探针是大豆的18s一28srDNA片段,检测出了3个二价体,表白陆 地棉中存正在3个NOR(nucleolar organizerregion)位点。从而猜测海岛棉也是如斯。 因而申明陆地棉的二倍体先人中此中一个有一个NOR位点,另一个有2个NOR位 点。这是荧光原位杂交手艺正在棉花上的最早使用,鞭策了棉花细胞遗传学的成长。 母细胞中期的原位杂交阐发表白:18S-28SrDNA位于染色体9的长臂上(9L),这是 正在棉花染色体上第一个做图的分予标识表记标帜。Crane等(1993)使用18s一28s、5srDNA对 陆地棉减数染色体进行荧光原位杂交,正在陆地棉的减数染色体上定位了 18s一28s核仁组织区以及5s反复序列。这是通过正在易位四价体大将相关杂交位点 定位于特定上来进行做图。他们定位两个大的18s一28s位点别离正在染色体16的短 臂上,染色体23的左臂上,而且也判定出了两个大小不等的5s位点,大的位于染色 体9的近着丝粒区域,小的位于染色体23的近着丝粒区域。如许,染色体9和23各 包含一个大NOR和一个5srDNA位点,而染色体16、7各包含一个大NOR位点, 而没有5s 色体7、16是部门同源的。YuanfuJi(1995)正在陆地棉上使用荧光原位杂交对减数 四价体进行检测,不只检测出6个取易位断点相关的大的rDNA位点,并且检测出其 它11个小的18s-28srDNA位点,并别离做图到各个染色体或亚染色体区域上,即分 中国农业科学院博七学位论文 第一章文献综述 及D基因组棉种雷蒙德氏棉、瑟伯氏棉和AD基因组四倍体棉种陆地棉上的。单 位点的线性相关程度。并根据这些位点上的杂交信号的强弱将其划分为强、中等强度 的4个位点并不成以或许被确定来历取A、D哪个二倍体先人种。此外,陆地棉有2对(4 A基因组棉种草棉、亚洲棉以及D基因组棉种雷蒙德氏棉、瑟伯氏棉均被检测到有1 位点是线性相关的。可是正在亚洲棉(A2)和目前比力是陆地棉先人种的雷蒙德氏 点线性相关。别的从这些位点信号正在大小上的变化,且正在数目上四倍体棉种和它的以 被假定的供体种的位点数目缺乏相加性,这暗示着rDNA位点正在棉花上不是原封不动 陆地棉的减数二价体配对阐发染色体16和染色体23,而且对其臂长进行估量, 成果表白染色体23取其RFLP图上的成果分歧,这为进行染色体基因组减数比 较供给了一种有益东西,而且能够快速估量沉组效率。YuanfuJi(1999)使用易位杂 合子四价体(NI:Ⅳ)的荧光原位杂交对陆地棉上新判定的rDNA进行定位,除去以 的左臂上,同时对已知的17个rDNA位点,以及相关的着丝粒、端粒、NT断点总括 成了一个分析图谱。这大大便当了对于rRNA基因的演化和功能相关的特定位点的研 究。Michael等(1998)通过位点对棉花中编码18s、5.8s、25srRNA基因(rDNA) 的核仁组织做图,发觉rDNA反复大小正在间有200t’p的轻细变化,反复片段正在陆 变化,棉花rDNA中察看到的遗传多变性取通过程度检测的多样性是分歧的。 14 中国农业科学院博十学位论文 第一帝文献综述 ●I量曼曼—曾曼笪曼曼蔓曼■■—曼皇曼喜皇置■■■皇曼—●—量—■—■■—■■曼●■——■■■■—■—■●—■■■●曼■■■●■●■■■■————●■■■一 1.5反复序列的研究 1.5.1反复序列的分类和布局 构成高档生物染色体的DNA,大部门以反复序列的形式存正在。如小麦为异源六 倍体,是有A、B、D等3个基因组合成,A、B、D每个基因组的含量别离是水 稻的11.13倍,但水稻和小麦每个基因组的功能基因总数是相当的。这些编码基因具 有极高的同源性,正在染色体上的陈列次序也根基分歧。形成这DNA含量激增的次要 缘由是反复序列的大量发生和扩增,水稻基因组的50%为反复序列,而小麦中反复序 列的含量占其基因组的83%。 反复序列按其正在染色体上的分布体例,可分为反复序列(dispersed repetitive sequence)和反复序列(tandemrepetitivesequence)。按照其拷贝数将反复序列划分 为:卫星DNA(高度反复序列)、小卫星和微卫星DNA(中度反复序列)、转座 予(中度弥散、具转座功能)。反复序列的拷贝数良多,正在反复单元之间相互常有 小卫星和微卫星序列反复单元较小,由反复序列的差别和反复单元的数目变化,可形 成丰硕的多态性,因此可用于染色体定位和多态性阐发。形成间反复序列变 (unequalexchange),弥散型反复序列次要是依托转座c 和异位互换(eetopicexchange)。从进化的角度看,问反复序列变异是天然选择和 生物对顺应的成果,生物进化的程度越高,反复序列占DNA总量的比沉就越大, 如噬菌体基因组中反复序列占lO%,而正在人类中反复序列占人类基因组的90%。Baker 等0995)阐发了陆地棉的微卫星、反复序列、转座因子、低拷贝基因(过氧化氢酶 基因),认为棉花基因组中反复序列占40%.同其它实核基因组一样,反复序列是 棉花基因组最丰硕的反复DNA类型。 1.5.2反复序列的功能 就大部门反复序列的功能而言,反复序列无编码功能。但也有一些反复序列具编 码功能,别的一些反复序列参取告终构基因的沉组和调控、基因分化、染色体联会和 中国农业科学院博卜学位论文 第一章文献综述 体和第16染色体具部门同源性。别的一些 节制布局布局基因沉组和调控也可能是反复序列的功能之一。反复序列编码 区的主要构成元件,且处于一种动态变化之中,基因的表达可能受反复序列的切确调 控。统一基因插入分歧,其表达量判然不同,以至惹起靶基因的完全不表达,即 silence)。基因的表达明显还受布局基因间大量的非编码序 凡是所说的基因缄默(gene 列的调控。棉花的反复序列做为生物进化的产品,我们对其功能还知之甚少,还需要 做进一步的摸索,新兴的基因组学(gcnomics)和比力基因组学(comparativege.nomics) 将反复序列正在生物进化、基因调控方而的感化机理,发生一个愈加清晰的动态轮 廓 反复序列正在高档生物中的次要感化还有:(1)基因组分化:正在多倍体中,沉 复序列的变化使同源或部门同源的基因组向异源化标的目的成长,使这些减数行 为二倍体化,即正在减数终变期和中期,全数染色体配对构成二价体,少少或不形 雷蒙地棉(风)的分布。成果正在陆地棉上所有染色体上都发生强的信号,面A亚基因 个18s一26SrDNA中有4个不是它的猜测一倍体先人的,认为可能之一是缺失能够 麦的3个二倍体先人种中是共存的。然而正在通俗小麦中,这些序列从A、B、D的两 个基因组(至多一个)中消逝;正在人工新合成的多倍体小麦中,也一些本来是基因 组间共享的简单非编码序列,正在自交繁育过程中敏捷从个体基因组中删除。从而使同 一部门同源群的染色体之闽发生同化,以遗传的不变性。张学怯等(2000)正在研 究堰麦草属动物基因组构成中发觉,当两个以上的基因组归并构成一个新后,一 些序列可能会大量扩增,这些序列大都位于染色体端部及着丝点附近,同时基因组间 可能发生大量遗传物质的互渗,从而形成多倍体中的任一其因组分歧取其二倍体祖 先。正在我们操纵荧光原位杂交研究棉属时也发觉了这种现象。我们发觉正在海岛棉 曾经同步进化为A基因组的rDNA.。染色体上,申明了陆地棉中大大都反复序列 颠末染色体多倍化后履历了基因组闻协同演化。相关多倍体构成中,这类反复序 列大量扩增和互渗的机理还不十分清晰,但有一个十分可能的要素是转座子相反 转座子的感化,研究发觉绝大大都动物(包罗水稻、大麦、小麦、玉米等)都照顾反转 录转座子序列,正在凡是前提下它们处于缄默形态,但正在组织培育和远缘杂交后,很容 易被激活,大量扩增和转座,使其正在基因组中的拷贝数急剧添加。(2)转座子 16 中国农业科学院博L学位论文 第一覃文献综述 序列内凡是含有转座子,它们可将本人的拷贝插入到基因组中新的,转座子的插 入可惹起很多突变,并伴有较着的形态变化.以至惹起一些数量性状的变化。正在玉米中 发觉大量的转座子现实就是反复序列,它们插入到基因间区以至基因内部,影响和调 控这些基因的表达。反转座子是借帮于反酶大量复制本身的一类转座因子, 其内部包含一个很是主要的基因,即反酶合成基因,它是从DNA到mRNA再到 DNA转座的环节要素。正在水稻、大麦、小麦、玉米等都含有此类序列。反转座 端部反复序列,可编码取还原病毒卵白很是类似的卵白。non—LTR还原转座子缺乏长 的端部反复序列,它所编码的卵白取还原病毒卵白类似性较小。正在LTR还原转座子中, 子正在棉花染色体上的分布表白,还原转座子的克隆A108取所有陆地棉染色体均有杂 交信号,但信号随机分布的,它们成簇存正在于染色体端粒附近。而正在染色体着丝 粒附近很少或根基无信号显示。(3)参取染色体联会和配对。以TTTAGC袷为根基沉 复单元构成的卫星DNA存正在于所有一般染色体的两头,是端粒的次要构成之一,正在 维持染色体布局的不变性、防止染色体错配和非一般互换中起着举脚轻沉的感化,丢 失了端粒的染色体是极不不变的。正在细胞有丝和减数过程中,每条染色体的 两个端粒起首向相反的两极附着正在核膜上,然后才是染色质的浓缩和配对。Hohmann 可导致该染色体臂配对频次下降60%,而中部6%的缺失确只形成47%的下降。端部 异染色质正在染色体配对和互换中的感化是显而易见的。 1.5.3反复序列的同步进化 同步进化是指个别或种群内基因的反复单元之间发生随机而定向纯合 纯合,当这种力量较弱时,可察看到序列的杂合性。 同步进化是异源四倍体动物rDNA序列进化的主要体例,同步进化的机制次要是 不等互换和基因转换,并受异源多倍体构成年代、生殖体例、基因突变率等要素的影 响。杂交和多倍化是高档动物构成和进化的最主要的路子之一,约70%的被子植 物正在其进化过程中已经历过一次或多次多倍化事务。 17 中国农业科学院博士学位论文 第一章文献综述 化,阐发表白座位『日J协同演化正在异源多倍体中是双向的,而且发生正在杂交和染色 发生偏离,正在一个配合核仁中再连系,配合演化发生了新的核型,并超越了其二倍体 先人的根本。 序列是D基因组所特有的。以这些反复序列为探针对四倍体棉花基因组进行原位杂 交,成果发觉正在二倍体程度仅限于A基因组的反复序列不只正在A基因组染色体上有 很强的杂交信号,正在D基因组染色体上也同样显示很强的杂交信号,这就意味着多倍 棉花为材料,选用6个正在四倍体基因组中正在A和D基因组染色体上都表示较强杂交 信号的反复序列为探针,别离取A和D基因组供体的二倍体先人迸行杂交,成果发 现6个反复序列正在A基因组供体的二倍体先人基因组中都表示出预期的杂交式样,但 没有一个探针能正在D基因组供体的二倍体先人基因组中显示较着的信号,这进一步证 实了正在四倍体基因组中A基因组反复序列向D基因组的程度转移,或者是D基 因组中的部门同源序列已被A基因组的反复因子所代替或,Wendel称这种现象 为“基因组殖平易近化”。 rDNA的核酸序进行了阐发。虽然是对ITS区的PCR扩减产物间接测序,但仍察看到 所有二倍体、四倍体中都有单一的序列,不存正在基因座(site)多态性,申明二倍体、四 倍体ITS区反复单元之间的序列杂合性很低或不存正在,它们之间已接近或完全纯合。 为了验证基因座位问同步进化能否从rrs区扩展到了整个18S一26rDlNA反复序 杂合性,表白整个反复单元已发生了基因座位间同步进化。 5SrDNA也是高度反复序列,取45S的染色体基因座位分歧。5SrDNA的 反复单元问也可颠末同步进化而达到纯合。棉属的18S一26SrrDNA已发生了高度同步 进化,那么5S 由它们之间杂交、多倍化构成的4个多倍体种的5SrDNA及基因间隔区的序列进行了 阐发,其成果取18S.26SrDNA的表示完全分歧。虽然每一只测了基因组中几千 个反复中一位内的2一10个克隆,但每个序列都不不异,表白棉属动物5SrDNA多态 性程度很是高,这种多态性不只存正在于种阃并且存正在于个别内。间平均有12%的 核酸位点是多态的,并且5SrDNA和间隔区的多态位点比例基木相等。正在多倍体 18 中国农业科学院博_L学位论文 第一荦文献练述 (AADD)中察看到先人的A、D基因组序列同时存正在,且所占比例附近,申明亲本的 5S rDNA反复序列正在多倍体中各自进化,也即多倍体中基因座内同步进化强于基 因座间的彼此感化,5S rDNA的同步进化次要发生正在基因簇(array)程度,他们认为棉 rDNA 属多倍体的5SrDNA没有发生正在基因座间同步进化,棉属18S一26SrDNA和5S 18S一26S rDNA位于染色体的端部或近端部,这些的染色体交叉和互换不会发生 不良的细胞遗传学后果,而5S rDNA位于染色体的中部,这部门染色体的不等位互换 将导致遗传不均衡或发生无活力的配子,因而,他们认为正在多倍体中,染色体中部的 DNA序列取端部或近端部序列比拟,将连结更高的基因座间多态性。此外,每个基 因簇内反复中一位数日、基因突变率、天然选择的强度、无效种群大小等要素对同步 进化速度也有主要影响。 1.5.4反复序列的使用 1.5.4.1研究的发源取演化 反复序列是正在程度上研究发源和进化最无效手段之一。动物的基因组中 都含有一些或基因组反复序列,研究这些序列正在间,出格是正在二倍体和 个四倍体种(AAD)及其二倍体亲本种(AA、DD)的18S-26SrDNA的核酸序进行了阐发。 察看到所有二倍体、四倍体中都有单一的序列,不存正在基因座(si哟多态性,申明二倍 体、四倍体ITS区反复单元之间的序列杂合性很低或不存正在,它们之间已接近或完全 纯合,风趣的是,黄褐棉的rDN序列全数同步进化成了A基因组的序列,而其他4 个四倍体棉种海岛棉、陆地棉、棉和毛棉rDNA全数进化成了D基因组的rDNA 序列。为了验证基因座位闻同步进化能否从ⅡS区扩展到了整个18S一26rDNA反复序 杂合性,表白整个反复单元己发生了基因座位间同步进化。Zhao(1998)发觉拟似棉除 了包含一般尺度的D基因组反复序列外,还包含一个特定的A基因组的反复,认为 这个大概是新世界棉先人中关系比来的现存儿女。 1.5.4.2染色体图谱绘制 操纵反复序列能够绘制染色体指纹图谱、遗传连锁图谱和物理图谱。简单沉 19 中国农业科学院博十学位论文 第一覃文献综述 复序列(sequence DNA)。 是由14个碱基对构成的简单反复序列,正在动动物中具有很高的多态性.被普遍使用于 农艺性状的标识表记标帜和连锁做图。 减数荧光原位杂交能够分析现存的遗传性状分手图谱和RFLP图谱,易位、 端粒、着丝粒的互换沉组图以及理图谱。YuanfuJi等(1995)用此法对陆地棉进行了 位杂交表白,B77位点正在D一亚基因组的左臂上,而且这个左臂等于短臂,成果申明减 数的荧光原位杂交是分析形态、、细胞遗传标识表记标帜图谱的无力东西。Yuanfu Ji(1995)正在陆地棉上使用荧光原位杂交对减数四价体进行检测,不只检测出6个取 易位断点相关的大的rDNA位点,并且检测出其它11个小的18s.28srDNA位点,并 别离做图到各个染色体或亚染色体区域上,即别离做图到染色体9、17、19、20的左 臂上、及染色体5、“、12、15的左臂上、染色体8、lO、14的非确定臂上,完成了 对棉属四倍体种陆地棉的减数二价体配对阐发染色体16和染色体23,而且对其 臂长进行估量,成果表白染色体23取其RFLP图上的成果分歧,这为进行染色体基 因组减数比力供给了一种有益东西,而且能够快速估量沉组效率。 1.5.4.3标识表记标帜辅帮选择 目前反复序列的标识表记标帜辅帮选择次要表现正在SSR使用方面。袁有禄(2000)用 值和长度极值库筛选后获得了15个标识表记标帜,此中12个标识表记标帜分成了3个连锁群,并检测 到一个高强纤维的从效QTL。 1.5.4.4非整倍体、易位体、外源遗传物质等判定 Yuanfu 2(AD)1)的一个新的单体。他通过减数三沉阐发包罗基因组原位杂交了单 体的D.亚基因组发源;分歧的PI染色单体照顾有一个大的NOR区,并用5s、 18s一28s rDNA的双色原位杂交表白单体包含两个大的分隔的反复rDNA元件,从 而必定地判定出单体正在染色体23上。YuanfuJi等(1999)用荧光原位杂交手艺对片 段复制缺失进行判定,采用NTl4R-24RxTM.1的长苗,探针用B77。B77是海岛棉 学标识表记标帜。B77己被定位到陆地棉染色体14的左臂上(Ji1995)。这一手艺不只便于鉴 20 中国农业科学院博上学位论文 第一章文献综述 定dp-df,并且能够定位标识表记标帜位点到染色体。染色体臂及节段上,可以或许容易地域分dp-df 的邻一1、邻一2型,同时也能获得其它的非整倍体,也就是dp-df相关的单体、三体。 正在过去的50年里,棉花中浩繁的染色体易位体、大量单体、端体正在辐射或种间 杂交后都已恢复。通过减数的原位杂交,能够对这些取着丝粒、易位断点相关的 DNA探针进行物理做图。Crane等(1994)用18s、5srDNA为探针,对涉及染色体 5、9、23的TeTT(端体取易位纯合体的杂交)四价体进行减数原位杂交, 了18s、5s rDNA位点别离位于染色体9的对立臂、染色体23的同~臂上。这些原位 杂交的位点分布也申明了Tr5-9的易位点位于每条染色体的长

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